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冷凍離心機(jī)單核細(xì)胞分離技術(shù)

單核細(xì)胞分離技術(shù)
　　
　　(一)鐵粉吸附法
　　
　　1．材料及試劑
　　
　　(1)鐵粉或羰基鐵粉(Atomergicchemetals)99％的純度，顆粒小于60µm(GoodfellowMetals)。
　　
　　(2)強(qiáng)磁鐵(馬蹄形)。
　　
　　(3)一塊小棒狀磁鐵(約1cm長(zhǎng))。
　　
　　(4)毛細(xì)吸管等。
　　
　　2．操作方法
　　
　　(1)稱取一定量的鐵粉，一般為10g，用100ml生理鹽水洗滌4次，去除任何可溶性有毒物質(zhì)。在倒去鹽水時(shí)，用強(qiáng)磁鐵吸住鐵粉。
　　
　　(2)用50ml生理鹽水混懸鐵粉。搖勻后，分裝于10個(gè)瓶中，包扎瓶口，121℃滅菌20min，拿出后立即輕輕搖勻，防止鐵粉結(jié)塊，儲(chǔ)藏備用。
　　
　　(3)臨用前，倒去瓶中的生理鹽水，加入適量的單個(gè)核細(xì)胞懸液(3ml～5ml，細(xì)胞總數(shù)為8×107個(gè)／瓶)。37℃溫育45min，中間不時(shí)晃動(dòng)，使鐵粉懸浮起來(lái)。
　　
　　(4)加入一塊小磁鐵棒于瓶中，讓其吸住鐵粉以及附著在鐵粉上的細(xì)胞。
　　
　　(5)倒出懸液，此懸液主要是淋巴細(xì)胞，離心，收集。
　　
　　(6)在鐵粉瓶?jī)?nèi)倒入一定量的Hank’s液，用力振搖后，以強(qiáng)磁鐵吸附，幾分鐘后，倒出液體。
　　
　　(7)2000r/min離心液體，管底即為單核細(xì)胞。
　　
　　(二)玻璃板吸附法
　　
　　將分離的單個(gè)核細(xì)胞傾于無(wú)菌潔凈的玻璃平皿內(nèi)，置37℃30min～40min，用毛細(xì)吸管輕輕吸取懸液，即為淋巴細(xì)胞。用適量的Hank’s液沖洗平皿，收獲即為單核細(xì)胞懸液